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（凯基）全蛋白抽提试剂盒
产品名称：（凯基）全蛋白抽提试剂盒

产品货号：KGP250
规格包装：50T
品牌产地：南京凯基
产品价格：480元

（凯基）全蛋白抽提试剂盒

产品名称
规格
货号
品牌
价格
全蛋白抽提试剂盒
50T
KGP250
南京凯基
480
100
KGP2100
南京凯基
880
M-per(R) Manmmalian Protein Extraction Reagent
25ml
78503
Pierce
801
250ml
78501
Pierce
3088

 

凯基全蛋白提取试剂盒
Cat Number：KGP250   For Research Use Only
Store at -20℃ for one year
 
一、   试剂盒说明
本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白，用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效。获得的全蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀等后续研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂。
二、   试剂盒组份

组份
KGP250 （50 tests）
KGP2100（100 tests）
储存温度
Lysis Buffer
 50 mL
 100 mL
4℃
磷酸酶抑制剂
500 μL
1000μL
-20℃
蛋白酶抑制剂
50 μL
100 μL
-20℃
PMSF（100mM）
500 μL
1000 μL
-20℃

三、      操作步骤
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
 1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂， 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
2．  每100mg固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，注意低温操作；
3． 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；
4． 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
5． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1． 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；
2． 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10mL/150mm培养板的冷PBS，1000转/分离心5 min洗两次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂， 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
4． 细胞洗涤后，转至新的预冷的离心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：
细胞数量
Lysis Buffer加入量
107个
0.5 mL～1 mL
5×106个
0.2 mL～0.5 mL
5．置于4℃摇床平台上，温和振荡15 min；
6． 14,000rpm，4℃离心15min，取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
7． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
四、     注意事项
1． 所有接触样品的用具及试剂均需预冷。
2． 提取蛋白后，如有必要，可透析除去表面活性剂。