服务简介:客户需要提供构建好的外源基因载体,或目的基因基本信息;待转染的细胞系(1×10^6个细胞,可传代,倍增时间小于48小时)以及细胞培养条件的说明;目的蛋白一抗;预测被调控基因的蛋白的抗体等。
服务周期:视具体实验而定
概述
瞬时转染
采用瞬时转染的方法能够方便快捷地对基因功能进行研究与分析,且基因表达水平高,但通常只持续几天,多用于启动子和其他调控元件的分析。通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术,将靶基因导入细胞,一般在转染后48小时左右,靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的,48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。
稳定转染
稳定转染,就是转染的质粒DNA整合到宿主细胞染色体上,使宿主细胞可长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒,根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代,从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。
服务内容
◆质粒:
进行预实验,通过转染含有报告基因的质粒优化转染条件;
转染条件确定后,按照客户方案进行转染;
qPCR或Western Blot检测转染效率。
◆SiRNA:
根据基因序列,设计并合成siRNA;
进行预实验,通过转染带有荧光标记的阴性对照siRNA优化转染条件;
通过qPCR和Western Blot验证siRNA的沉默效率,筛选siRNA最佳使用浓度。
送样需知
待转染细胞株及细胞培养的相关信息
待转染的质粒信息
目的蛋白一抗
待转染的SiRNA
预测被调控基因的蛋白的抗体。