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凯基ECL检测试剂盒（KGP1123）
产品名称：凯基ECL检测试剂盒（KGP1123）

产品货号：KGP1123
规格包装：50ml*2
品牌产地：南京凯基
产品价格：380元

凯基ECL检测试剂盒（KGP1123）

产品名称
规格
货号
品牌
价格
凯基加强型ECL检测试剂盒
50ml*2
KGP1123
南京凯基
380
100ml*2
KGP1121
南京凯基
568

 

一、     试剂盒说明
凯基 ECL 检测液用于Western blot的化学发光检测，比化学显色法灵敏度高，可达ng水平。原理是采用新型发光底物（Luminol），其与辣根过氧化物酶反应时产生很强的光信号，在暗房中对X-光片感光，以此检测微量蛋白而获得理想的实验结果。
在电泳的过程中，将复杂的蛋白混合物经SDS-PAGE分离，并转移到固相膜上（如NC、PVDF）等，经辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗体与膜上的蛋白直接（标记一抗）或间接（标记二抗）反应。当加入凯基 ECL 检测液后，Luminol发生氧化降解，并发射波长为428nm的光，此光可经X光片（放射自显影片）感光记录下来。凯基 ECL 检测液用量为0.1mL/cm2。
凯基 Super ECL 检测液是在凯基 ECL 检测液的基础之上加以改进的，具有灵敏度高，持续时间长的特点，同时试剂盒的稳定性也有很大的提高。
二、     试剂盒组份 

 

组份
KGP1123
KGP1121
Stock A （避光）
25mL×2
25mL×4
Stock B
25mL×2
25mL×4
增强剂
50ul
100ul

 

三、 操作步骤
A．印迹膜制备
按常规方法完成SDS-PAGE和电转膜操作，接着封闭过夜，加入一抗，室温振荡1h，用PBST洗涤四次，每次10min；然后加入HRP二抗交联物，室温振荡1h，用PBST洗涤四次，每次10min。
B．ECL工作液的配制
取1.5ml的eppendorf管，然后加入500μL Stock A液和500μL Stock B液，再加入增强剂0.5ul混合后即为ECL工作液（配制后请尽快使用）。将膜片平铺，滴加ECL工作液使其将膜片完全覆盖(每平方厘米膜片至少使用0.1mLECL工作液)。
C.蛋白信号显现
    1. 用平头镊钳住膜片，垂直置于吸水纸以吸去过量试剂。
    2. 置膜片于二层保鲜膜之间，小心赶尽气泡。
    3. 将膜片吸附蛋白面朝上，置于X光片盒中。
    4. 于暗室中压上X光片。
    5. 曝光：如果在暗室中可肉眼看到比较亮的条带，建议曝光1分钟-3分钟；如果肉眼看到的带比较淡，
       建议曝光3-10分钟；如果很淡或基本看不到带，建议曝光10分钟-30分钟。
    6. 最后可以根据结果调节曝光时间，再次曝光显影。
四、 注意事项 
置于40C，可保存半年以上。