您现在的位置：网站首页 >> 产品中心 >> Western Blot
核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒
产品名称：核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒

产品货号：KGP150
规格包装：50T
品牌产地：南京凯基
产品价格：480元

核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒

产品名称
规格
货号
品牌
价格
核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒
50T
KGP150
南京凯基
480
100T
KGP1100
南京凯基
880
NE-PER(R) Nuclear and Cytoplasmic Extraction
50T
78833
Pierce
2586
250T
78835
Pierce
6863

 

凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒
Cat Number：               For Research Use Only
Store at -20℃ for one year                                                                 
 
一、   试剂盒说明
本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和/或胞浆蛋白，提取制备过程简便。制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性，并且纯度较高。提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、酶活性测定等后续蛋白质研究。
二、   试剂盒组份

组份
KGP150 （50 test）
KGP1100（100 test）
储存温度
Buffer A
 25 mL
25 mL ×2
4℃
Buffer B
 1.5 mL
3．0 mL
4℃
Buffer C
12.5 mL
25 mL
4℃
DTT
50μL
100μL
-20℃
蛋白酶抑制剂
250μL
500μL
-20℃
PMSF（100mM）
400μL
800μL
-20℃

三、操作步骤
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1、   组织样本，将组织剪切成小块，加入适量的冰冷PBS均浆后，静置5 min ，弃沉淀，小心吸取上清转移至另一离心管中；
2、   上清4℃离心500×g，3 min，弃上清，估计细胞压积PCV（离心后的紧实细胞体积）；
3、   每20μL细胞压积中，加入200μL预冷的Buffer A【使用前每mL Buffer A加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂】，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上10～15min；
4、   加入11μL冷Buffer B，最大转速涡旋剧烈振荡5s，放置冰上1min；
5、   再次最大转速涡旋剧烈振荡5s后， 4℃离心，16000×g,5min；
6、   尽快将上清转入另一预冷的洁净微量离心管，置于冰上，即得胞浆蛋白；
7、   在离心沉淀物（细胞核）中加入100μL预冷的Buffer C (使用前每mL Buffer C加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂)，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上40min，每间隔10 min涡旋剧烈振荡15 seconds；
8、   4℃离心，16000×g,,10min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管，即得核蛋白；
9、   上述提取的胞浆蛋白和核蛋白进行蛋白定量（Braford法或BCA法），分装并保存于-80℃，避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1、   取培养细胞5×106～1×107个/mL，4℃离心，500×g,3 min收集细胞，弃去培养液，用预冷的PBS洗涤两遍；
2、   用移液枪尽可能取去上清，勿留残液，估计细胞压积PCV（离心后的紧实细胞体积）；
3、   每20μL细胞压积中，加入200μL预冷的Buffer A【使用前每mL Buffer A加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂】，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上10～15min；
4、   加入11μL冷Buffer B，最大转速涡旋剧烈振荡5s，放置冰上1min；
5、   再次最大转速涡旋剧烈振荡5s后， 4℃离心，16000×g,5min；
6、   尽快将上清转入另一预冷的洁净微量离心管，置于冰上，即得胞浆蛋白；
7、   在离心沉淀物（细胞核）中加入100μL预冷的Buffer C (使用前每mL Buffer C加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂)，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上40min，每间隔10 min涡旋剧烈振荡15 seconds；
8、   4℃离心，16000×g,,10min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管，即得核蛋白；
9、   上述提取的胞浆蛋白和核蛋白进行蛋白定量（Braford法或BCA法），分装并保存于-80℃，避免反复冻融。
四、     注意事项
1、 所有的试剂及器具均需预冷后使用；
2、 细胞的数量不应少于0.5×107个/mL；，
    3、 以上各缓冲液的使用量是以20μL细胞压积为例，如细胞压积不同，请参考下表加入各缓冲液。

细胞压积PCV
Buffer A
Buffer B
Buffer C
10μL
100μL
5.5μL
50μL
20μL
200μL
11μL
100μL
50μL
500μL
27.5μL
250μL
100μL
1mL
55μL
500μL

    4、 一般常规提取的蛋白样品，进行后续试验不需要透析，但如果需要较大量的提取蛋白或后续试验结果不理想，则需要将提取的蛋白样品进行透析脱盐，建议使用凯基透析Buffer (Cat: KGB—P001)透析后进行后续分析。