凯基加强型ECL检测试剂盒(KGP1124)
产品名称:凯基加强型ECL检测试剂盒(KGP1124)

产品货号:KGP1124
规格包装:50ml
品牌产地:南京凯基
产品价格:480元

产品名称
规格
货号
品牌
价格
凯基加强型ECL检测试剂盒
50ml
KGP1122
南京凯基
480
100ml
KGP1124
南京凯基
598
 
凯基加强型ECL检测试剂盒
Cat NumberKGP1124         For Research Use Only
Store at 4℃ for 6 months
Expire date20120301                                                           
  
一、     试剂盒说明
凯基 ECL 检测液用于Western blot的化学发光检测,比化学显色法灵敏度高,可达ng水平。原理是采用新型发光底物(Luminol),其与辣根过氧化物酶反应时产生很强的光信号,在暗房中对X-光片感光,以此检测微量蛋白而获得理想的实验结果。
在电泳的过程中,将复杂的蛋白混合物经SDS-PAGE分离,并转移到固相膜上(如NC、PVDF)等,经辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗体与膜上的蛋白直接(标记一抗)或间接(标记二抗)反应。当加入凯基 ECL 检测液后,Luminol发生氧化降解,并发射波长为428nm的光,此光可经X光片(放射自显影片)感光记录下来。凯基 ECL 检测液用量为0.1mL/cm2
凯基 Super ECL 检测液是在凯基 ECL 检测液的基础之上加以改进的,具有灵敏度高,持续时间长的特点,同时试剂盒的稳定性也有很大的提高。

二、     试剂盒组份 

 

组份
KGP1124
KGP1122
Stock A (避光)
25mL×2
25mL×4
Stock B
25mL×2
25mL×4
增强剂
50ul
100ul
 
三、 操作步骤
A印迹膜制备
按常规方法完成SDS-PAGE和电转膜操作,接着封闭过夜,加入一抗,室温振荡1h,用PBST洗涤四次,每次10min;然后加入HRP二抗交联物,室温振荡1h,用PBST洗涤四次,每次10min。
B.ECL工作液的配制
取1.5ml的eppendorf管,然后加入500μL Stock A液和500μL Stock B液,再加入增强剂0.5ul混合后即为ECL工作液(配制后请尽快使用)。将膜片平铺,滴加ECL工作液使其将膜片完全覆盖(每平方厘米膜片至少使用0.1mLECL工作液)。
C.蛋白信号显现
    1. 用平头镊钳住膜片,垂直置于吸水纸以吸去过量试剂。
    2. 置膜片于二层保鲜膜之间,小心赶尽气泡。
    3. 将膜片吸附蛋白面朝上,置于X光片盒中。
    4. 于暗室中压上X光片。
    5. 曝光:如果在暗室中可肉眼看到比较亮的条带,建议曝光1分钟-3分钟;如果肉眼看到的带比较淡,
       建议曝光3-10分钟;如果很淡或基本看不到带,建议曝光10分钟-30分钟。
    6. 最后可以根据结果调节曝光时间,再次曝光显影。
四、 注意事项 
置于40C,可保存半年以上。